王健瑞1 乔晋琳2路平2邓轶1刘凤桐1车向宜1 董兆德 2陈蕾1马广昊2

　［摘要］目的 通过模拟第三腰椎横突周围无菌性炎症的方法，建立第三腰椎横突综合征动物实验模型，于两种不同动物重复用同一造模方法以考察其可靠性。材料和方法 将90只SD大鼠随机分为四组；正常组、假手术组、材料实验组及模型组。于造模后4天、10天、30天进行组织病理学观察；4天、10天、30天进行全血、前列腺环素、内皮素、5-羟色胺观察；0、1、8、15天进行机械性压迫痛阈实验；将20只日本大耳白纯种兔随机分为四组；模型组、材料实验组、假手术组及正常组。于造模后4天、10天、30天进行组织病理学观察；4天、10天、30天进行全血、前列腺环素、内皮素、5-羟色胺观察；0、1、8、15天进行机械性压迫痛阈实验。结果 本模型可以在第三腰椎横突周围出现明显无菌性炎症、瘀血、水肿及后期有瘢痕形成。经组织细菌培养，无细菌感染。模型组炎性介质等指标显著高于材料实验组、假手术组及正常组（p<0.01）。结论 本模型可以对第三腰椎横突周围无菌性炎症作出真实反映。

［关键词］第三腰椎横突综合征  无菌性炎症  骨骼—肌肉系统功能性损伤   反复性应力损伤  动物模型

Establishment and experimental study of the third lumber vertebrae transverse foramen syndrome of animal test model in rats、rabbits Wangjianrui,Liufengtong,etc.( Beijing Uinversity of TraditionalChinaese Medicine,Beijing100029)QiaojinglinLuping.etc.(NAVY hospital Beijing 100037)

[Abstract]  Objective Establish model of the third lumber vertebrae transverse foramen syndrome in the rat、rabbit though imitive aseptic inflammation around the third lumber vertebrae transverse foramen.Methods 90 SD rats 、20 rabbits were divied into 4 groups : model groups、false operation groups、method test groups、normal groups.Patological observation on the 4、10、30days after operation ,ET-1and 5-HT、6-keto-PGI21аRIA obervation on the 4、10、30days after operation . Changes in mechanical stimulation withdraw threshold obervation on the 1、8、15、days after operation. Results this model could obviously lead to in flammation、extrvasated blood 、dropsy and function damnification of the nerve conduet. As compared with the N group,significant differencein the M group of ET-1, PGI2,5-HT(p<0.05).Conclusions the method of the imitive aseptic inflammation could reflect functional bone—muscular stress clearly aseptic inflammation model of the third lumber vertebrae transverse foramen syndrome.

[Key words]： Third lumber vertebrae transverse foramen syndrome   Functional bone—muscular   Aseptic Inflammation    Recurrent stress lesion myofascitis  Animal test model

第三腰椎横突综合征作为一类骨科常见病有其复杂的病因学、病理生理及生物力学机制。其中，骨骼—肌肉系统解剖学及力学改变对于其发病有重要影响。一般认为:急慢性损伤引起的疼痛（原发因素），好发部位多在骨骼肌与肌腱和韧带附着处。本综合征主要由于第2腰神经后外侧支穿过横突背侧，向下进入骶棘肌时，附丽于横突上的肌纤维、韧带及其他组织周围因为骨骼—肌肉系统无菌性炎症损伤产生粘连及瘢痕，这种损伤和炎症刺激不但可造成神经系统的功能障碍，如感觉、运动和植物神经功能的丧失，而且常常可导致神经行为的减退和丧失，亦可导致神经行为的异常表现，如痛觉过敏，表现为机体对各类伤害性刺激的敏感性和反应性显著增强；痛觉感觉异常，一种对非伤害刺激作出伤害感觉性反应。目前临床对于上述炎性疾病多采取针灸、理疗等非药物性治疗方法。如何对以上方法进行评价；需要多方面的研究工作。我们通过建立一种与临床相适应的动物模型，从实验研究角度来探讨第三腰椎横突综合征发病原因、病理生理及相关治疗方法的疗效评价。两年以来，我们用化学性损伤，药物性损伤或改变其力学结构的方法，以鼠、兔两种动物作为实验对象，对于单一致炎因素在同一时期对于第三腰椎横突周围组织的炎性作用进行反复观察,现将以明胶海绵为材料的实验情况报告如下。

材料和方法

1材料

1.1动物

雄性SD大鼠90只，二级，三月龄，体重300-350g,由北京维通利华实验动物中心提供，在中国中医研究院基础所实验动物中心二级动物室喂养。雄性大耳白纯种兔20只，一级，体重2-2.5Kg，由北京富华实验动物养殖场提供，喂养条件同鼠。

1.2药物与试剂

明胶，苏卫药准字295901号；南京第三制药厂；6-酮-前列腺素F1аRIA试剂盒，卫药准字R-69号；内皮素-1试剂盒，卫药准字R-68号；均由中国人民解放军总医院科技开发中心提供，中国人民解放军海军总医院海科锐放免中心测定。全血指标由海军总医院检验科测定。5-羟色胺由中日友好医院临床研究所生理室测定。

2方法

2.1 动物分组

两种动物喂养3～5天后都随机分为四组:Ⅰ组,正常对照组; Ⅱ组, 模型组 ; Ⅲ组, 材料实验组,其意义检验材料的生物相容性，排除干扰因素; Ⅳ组假手术组。                  

2.2主要药物及试剂

模型制作：手术过程;10%速眠新（25mg/kg）大鼠、兔肌肉麻醉。麻醉满意后，无菌术下取大鼠、兔腰背部纵向切口3cm,向两侧剥离骶棘肌，显露L3～L4棘突，用微型骨科器械处理其横突周围组织至椎板，小心保护腰神经出椎间孔处组织结构,完整分离腰脊深筋膜脊神经后支穿出部分。然后，抽签选择三种不同处理。模型组：切除部分明胶海绵约0.5㎜×0.5㎜大小,植入腰三横突后半段深筋膜中层下，保留完整肌筋膜,彻底止血。假手术组：分离至腰脊筋膜下，显露腰三横突。材料实验组：如模型组同样处理，同样大小明胶海绵置于臀大肌下。正常组为不做任何处理。所有动物骶棘肌筋膜及皮肤均用0号线各等距离缝合三针，切口用庆大霉素反复冲洗，用免贴妥喷雾。麻醉苏醒后在同一饲养条件下饲养，于4天、10天、30天各组随机选取动物进行各项观察与指标检测。

2.3取血

    大鼠第4天、10天、采用摘除眼球法取血，第30天用颈动脉插管取血法。兔第4天、10天、及30天均采用耳缘背侧静脉穿刺。

2.4取材

    大鼠断颈法处死后，兔气栓法处死后，立即取L3～L4腰椎节段福尔马林固定；并取新鲜组织作牛血清细菌培养。

2.4检测指标

2.4.1  PGI2静脉穿刺血浆3ml、ET-1静脉穿刺血浆5ml即刻与消炎痛-EDTA.Na2液0.2ml在一次性5ml空针内混匀，注入试管内，4℃离心3500rpm,15min，分离血清, -20℃保存。

2.4.2   5-HT静脉穿刺血清3ml即刻与低分子肝素在一次性5ml空针内颠倒混匀，注入玻璃试管内，4℃离心3500rpm,15min，分离血浆,-20℃保存。

2.4.3         PLT  静脉穿刺血浆1ml即刻与低分子肝素2ml在一次性5ml干燥管内颠倒混匀，4℃保存。

2.4.4机械性痛敏实验  自制的痛觉测定器测定痛觉阈值。测定器由一个10 ml的塑料注射器改制而成，将注射器的针尖磨钝，内芯做成活塞。测定时将注射器针头置于左侧后肢的第4，5跖骨之间，然后再将砝码加于注射器的活塞上，每次加6 g，直到大鼠产生收缩反应，记录收缩时的砝码质量。每次测试至少间隔10 min，测量3次，取其平均值。以术前1 d测得的痛阈值为基础痛阈。并由以下公式：〔（造模后的后肢收缩砝码质量-基础痛阈）/基础痛阈）×100%，计算出其变化百分数，以此为测定痛阈变化的指标。结果为正值表示痛觉反应迟钝，负值表示痛觉反应过敏。

2.4.5光镜观察取所有动物的关节节段，4%福尔马林固定、5%硝酸脱钙，酒精逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，HE染色。光镜下观察肌肉、韧带及其炎性病理改变。

2.5 统计学处理　各组数据均以平均值±标准差（ ±s）表示，组间比较用均数差别的t检验。P＜0.05为差异有显著性，P＜0.01为差异有非常显著性。

3 结果：

3.1  两种动物不同时期血浆PGI2（pg/ml）、ET（pg/ml）等含量的变化

     模型组术后4～30天PGI2有明显的升高，然后逐渐恢复正常。材料组术后亦产生明显的升高，与模型组相比有显著差别（P<0.05）；而在假手术组，大鼠的PGI2升高程度较模型组大鼠明显降低，但与材料实验组无显著性差别。ET各组间、不同时期无显著性差别。

       表1大鼠不同观察时期血浆PGI2、ET等含量的变化

注：与正常组比*P<0.01,**P<0.05;与模型比ΔP<0.05

 表2兔不同观察时期血浆PGI2（pg/ml）、ET（pg/ml）等含量的变化

3.2  两种动物不同时期血浆PLT、5-HT含量的变化

 模型组术后4～30天5-HT含量有明显的升高，然后逐渐恢复正常。材料组术后5-HT含量亦升高，与模型组相比有显著差别（P<0.05）；而在假手术组5-HT含量升高程度较模型组低，与材料实验组无显著性差别。PLT含量无显著性差别。

表3大鼠不同观察时期血浆PLT(10^g/l)、5-HT(ng/ml)等含量的变化